Sammenligning av cytokinmålinger med ELISA og multiplex ved eksperimentell sepsis hos gris

Abstract

Inflammasjon er immunsystemets respons på skadelige stimuli. Cytokiner er nøkkelkomponenter i responsen og identifisering og kvantifisering av cytokiner gir viktig informasjon om inflammasjonsstatus. I studien undersøkte vi plasmaprøver fra 24 gris tatt 15 minutter før og ved start av intravenøs infusjon av Neisseria meningitidis. Deretter ble prøver tatt etter 60, 120, 180 og 240 minutter under utvikling av gramnegativ sepsis. To kontrollgriser uten bakterier ble inkludert. Videre undersøkte vi homogeniserte vevsbiopsier tatt post mortem. 5 sentrale cytokiner: IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 og TNF ble målt og formålet med oppgaven var å sammenligne to mulitplexkit med ELISA. Data ble analysert i GraphPad Prism, ved bruk av variansanalyse (ANOVA) og vha. Bland-Altmans plots.

Plasmaprøver viste følgende: • IL-8: 13-plex mest sensitiv, ELISA moderat og 9-plex ikke påvisbar. • IL-6: ELISA mest sensitiv, 13-plex knapt påvisbar og 9-plex ikke påvisbar. • TNF: ELISA mest sensitiv, 9-plex og 13-plex knapt påvisbar. • IL-1β: 13-plex og ELISA mest sensitiv, 9-plex ikke påvisbar. • IL-10: 9-plex med stigning i forløpet, 13-plex og ELISA uten endring. Vevsprøvene viste følgende: • IL-6 og IL-8: 13-plex klart mest sensitiv i alle organer. • IL-10: 9-plex var mest sensitiv i alle organer. • TNF og IL-1β: ELISA var generelt mest sensitiv. Bland-Altmans plot viste at ELISA generelt ga høyere verdier enn 13-plex for plasmaprøver og at differansen økte ved økende cytokinkonentrasjon.

Vi konkluderte at det er en vesentlig forskjell på hvilken analysemetode man bruker for kvantifisering av cytokiner hos gris. ELISA og 13-plex var generelt mer sensitive enn 9-plex. Resultatene har betydning for valg og tolkning av cytokinverdier i fremtidige forsøk med gris. Med de leverandørene vi bruke, kan ELISA anbefales for plasma IL-6, TNF og IL-1β, og for vev TNF og IL-1β. 13-plex kan anbefales for plasma IL-8 og IL-1β og for vev IL-6 og IL-8. 9-plex kan anbefales for både plasma og vev IL-10.